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熒光光譜微檢測技術(shù)

       檢測系統(tǒng)是芯片系統(tǒng)研究的關(guān)鍵之一。檢測器的總體性能將影響整個微流控芯片分析系統(tǒng)的檢出限、檢測速度、適用范圍以及體積等指標,是微流控芯片分析系統(tǒng)的一個關(guān)鍵部分。因此有關(guān)檢測器和檢測方法的研究已經(jīng)成為微流控芯片領(lǐng)域的一個重點和熱點。在眾多的檢測方法中,光譜檢測由于其具有良好的選擇性、較寬的線性范圍、微量定性定量分析和非破壞性檢測等特點,已逐漸成為該領(lǐng)域研究中應(yīng)用最廣泛,靈敏度最高的檢測技術(shù)之一。光譜微檢測技術(shù)是微全分析系統(tǒng)芯片(如:微流控生物PCR 芯片、微流控微分析化學芯片和毛細管電泳微分析芯片等)的核心技術(shù)之一。

      

       目前國內(nèi)外普遍使用的、基于熒光能量傳遞技術(shù)的熒光定量PCR技術(shù)有:TaqMan 技術(shù)、Amplisensor 技術(shù)、Molecular beacon 技術(shù)(分子信標)、Lightcycler 技術(shù)和Complexprobes 技術(shù)(復(fù)合探針法)。通過對上述幾種PCR 定量技術(shù)的分子生物學理論和技術(shù)特征分析,可以做出這樣的診斷:盡管上述幾種PCR 定量技術(shù)在生物工程技術(shù)層面上的原方法各不相同,但它們的熒光發(fā)光機理以及發(fā)光目的都是破壞兩個熒光分子間的FRET,從而發(fā)出熒光,熒光強度與溶液中模板量成正比,根據(jù)熒光強度以及強度相對變化的信息,可對PCR 產(chǎn)物進行定性定量分析。因此,以量值溯源的要求對PCR 定性、定量分析的熒光檢測進行研究,將從根本上提高PCR 定量技術(shù)的精確性和可靠性。根據(jù)光學原理的不同,光譜檢測課細分為熒光檢測,吸收光度檢測和電化學發(fā)光檢測。熒光檢測由于具有高靈敏度,高檢測范圍和可容易實現(xiàn)等諸多優(yōu)點,被廣泛采用。熒光基團通常各自擁有單一的光吸收峰,在光的刺激下,熒光基團吸收光的能量后通常以三種方式釋放能量,見圖(3,4,5)。
 

1:光能:許多熒光基團吸收光能以后仍舊以光能形式釋放能量,并且發(fā)射光的峰值大于吸收峰。
2:熱能:某些熒光基團吸收光能后,能量轉(zhuǎn)換為熱量擴散到環(huán)境中。
3:轉(zhuǎn)移給臨近的分子:當臨近的分子滿足發(fā)生能量轉(zhuǎn)移的要求時,能量從熒光基團傳遞到臨近的分子。熒光標記基團在某波長的激發(fā)光刺激下,產(chǎn)生一個更長波長的發(fā)射光。

微流控芯片|微流控芯片批量加工


標簽:  熒光光譜 微檢測技術(shù) 生物芯片